细胞介绍
细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。
细胞特性
1) 来源:BALB/c小鼠脑
2) 形态:内皮细胞样 贴壁生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM ( 含NaHCO3 1.5g/L) 培养基,优质胎牛血清,10%,双抗 1%。
注意:(bEnd.3细胞对培养基pH值的任何不平衡都很敏感。使用配方含有3.7 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基培养细胞时为稳定培养基PH值,增加CO2是必要的,否则这些细胞不会很好地附着或增殖,细胞建议在空气,90%、二氧化碳,10%环境中培养。经验证在空气,95%;二氧化碳,5%的环境下使用含1.5 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基会比较好,推荐使用含1.5 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基+优质胎牛血清10%来培养。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%FBS,10%DMSO,现用现配。